Onderdeel van de pijler microbiologische bemonstering van het TAAG Leercentrum. Het is de stap die volgt op het nemen van monsters zoals beschreven in de gids over oppervlakken en in bemonsteringsplannen op basis van attributen.
Inhoudsopgave
Het monster blijft veranderen nadat het is genomen
Tussen het moment waarop een monster wordt genomen en het moment waarop de analist het opent, kunnen uren of dagen verstrijken. In dat interval kunnen bacteriën zich vermenigvuldigen als het monster opwarmt, afsterven als een product dat gekoeld moest reizen wordt ingevroren, of blootgesteld blijven aan een ontsmettingsmiddel dat niet is geneutraliseerd. Het eindresultaat beschrijft het monster zoals het in het laboratorium aankwam, niet noodzakelijk zoals het in de fabriek was.
Het Bacteriological Analytical Manual (BAM) van de FDA stelt het zonder omwegen: als monsters op onjuiste wijze worden verzameld, slecht worden behandeld of de partij niet vertegenwoordigen, hebben de laboratoriumresultaten geen betekenis. Dit artikel geeft weer wat de belangrijkste referenties zeggen over hoe je het monster van het bemonsteringspunt naar de tafel van de analist brengt.
Verpakkingen en etikettering
Het BAM beveelt aan het product, waar mogelijk, in zijn ongeopende originele verpakking te sturen. Als dat niet kan, moeten porties aseptisch worden overgebracht in schone, droge, steriele, hermetische recipiënten met wijde opening, waarbij glas wordt vermeden omdat dat kan breken. Voor droge producten zijn steriele zakken of blikken geschikt; steriele plastic zakken mogen alleen worden gebruikt met droge, niet-bevroren materialen. Enkele concrete aanbevelingen:
- Minstens 100 g per monstereenheid verkrijgen.
- De zakken niet overvullen en voorkomen dat sluitdraden ze doorboren.
- Elke eenheid identificeren met geëtiketteerde tape; het BAM raadt af met een stift op plastic te schrijven omdat de inkt erdoorheen kan lopen.
- Als controle een lege steriele verpakking meesturen die aan dezelfde omstandigheden als de bemonstering is blootgesteld.
- Datum en tijdstip van afname en van aankomst in het laboratorium van elk monster registreren.
Temperatuur naargelang het type product
De algemene regel van het BAM is de monsters zo snel mogelijk aan het laboratorium af te leveren en, voor zover mogelijk, hun oorspronkelijke bewaarcondities aan te houden:
- Droge of ingeblikte niet-bederfelijke producten: kunnen bij kamertemperatuur reizen.
- Diepgevroren producten: moeten te allen tijde volledig bevroren blijven, in voorgekoelde verpakkingen en stijve geïsoleerde containers.
- Gekoelde producten: worden op ijs gekoeld tot 0-4 °C en vervoerd in een koelbox die die temperatuur tot aankomst kan handhaven. Ze mogen niet worden ingevroren. Tenzij anders aangegeven, zouden ze niet later dan 36 uur na afname geanalyseerd moeten worden.
- Weekdieren en schaaldieren: hebben eigen condities. Het BAM geeft aan ze idealiter binnen 6 uur en nooit later dan 24 uur na afname te onderzoeken.
Voor vloeibare monsters stelt het BAM voor een extra eenheid te nemen als temperatuurcontrole en die bij het nemen van het monster en bij ontvangst te meten. Het is een eenvoudige manier om te documenteren dat de koudeketen is behouden.
Oppervlaktemonsters: de neutralisator en de klok
Bij monsters van wattenstaafjes en sponzen komt een extra factor kijken: resten van ontsmettingsmiddel. Als die niet worden geneutraliseerd, kunnen ze tijdens het transport micro-organismen blijven inactiveren en een vals-negatief opleveren. De editie van 2004 van ISO 18593 wees er al op dat er geen universele neutralisator bestaat en noemde enkele gebruikelijke opties: lecithine en sorbitaanmono-oleaat voor quaternaire ammoniumverbindingen, natriumthiosulfaat voor producten op basis van halogenen, en catalase of peroxidase voor ontsmettingsmiddelen op basis van peroxiden. Het is verstandig de neutralisator te kiezen naar het ontsmettingsmiddel dat de fabriek gebruikt, zoals besproken in de gids over verificatie van oppervlakken na sanering.
De huidige versie, ISO 18593:2018, is de referentie die Verordening (EG) 2073/2005 vastlegt voor de bemonstering van procesgebieden en -apparatuur. Ze geeft aan de monsters gekoeld te vervoeren, tussen 1 °C en 8 °C, en ze bij voorkeur binnen 24 uur na afname te onderzoeken. Voor karkassen van dieren verwijst dezelfde verordening naar ISO 17604, die de bemonsteringsmethoden en de regels voor opslag en transport beschrijft.
Watermonsters: het restchloor
Gechloreerd water stelt hetzelfde probleem als gesaneerde oppervlakken: het chloor blijft werken in de fles. ISO 19458:2006, de norm voor watermonstername voor microbiologische analyse, geeft aan natriumthiosulfaat aan de flessen toe te voegen voordat het monster wordt genomen. Volgens de norm is 7,1 mg natriumthiosulfaatpentahydraat nodig om 1 mg chloor te inactiveren, en is de gebruikelijke dosis 0,1 mL van een oplossing van 18 mg/mL per 100 mL inhoud van de fles. Bij hogere chloorconcentraties is een grotere dosis nodig. De norm verduidelijkt dat thiosulfaat het monster niet beïnvloedt en ook bij niet-gechloreerd water kan worden gebruikt. De interpretatie van waterindicatoren wordt uitgewerkt in het artikel over coliformen, E. coli en enterokokken in water.
De verzending plannen vóór het bemonsteren
Een groot deel van de transportproblemen wordt vermeden voordat het eerste monster wordt genomen. Het BAM beveelt aan het laboratorium vooraf te waarschuwen wanneer bederfelijke monsters worden opgestuurd, en die afstemming maakt het mogelijk drie dingen te bevestigen: dat het laboratorium de monsters binnen de maximale termijn kan ontvangen en verwerken, welk volume of gewicht het voor elke analyse nodig heeft en welke acceptatiecriteria het bij ontvangst toepast. Het is ook verstandig te bepalen wie tijdens het traject verantwoordelijk is voor de koelbox, waar de temperatuur wordt geregistreerd en hoe monsters met verschillend risico worden gescheiden, bijvoorbeeld eindproduct en afvoermonsters, om kruisbesmetting ertussen te voorkomen.
De ontvangst in het laboratorium
De controle eindigt niet aan de deur van het laboratorium. Het BAM beschrijft een ontvangst met duidelijke stappen:
- De staat van de verpakking nakijken: breuken, perforaties, losse deksels of lekke zakken maken het monster ongeldig wegens risico op kruisbesmetting.
- Etikettering en registraties verifiëren: elke eenheid moet geïdentificeerd aankomen, met haar documentatie en, bij officiële monsters, verzegeld.
- Het bemonsteringsplan nagaan: dat het aantal eenheden is genomen dat bij de gevraagde analyse hoort.
- Opslaan als niet onmiddellijk wordt geanalyseerd: bevroren producten bij −20 °C, gekoelde bederfelijke producten bij 0-4 °C voor niet langer dan 36 uur en niet-bederfelijke of laagvochtige producten bij kamertemperatuur.
- De persoon die het monster nam waarschuwen wanneer het niet aan de condities voldoet, om een geldig monster te krijgen en herhaling van het probleem te voorkomen.
Ontdooien zonder het monster te veranderen
Het BAM geeft de voorkeur aan niet ontdooien vóór de analyse. Is het nodig, dan beveelt het aan dat te doen in de originele verpakking, bij 2-5 °C, wat normaal tot 18 uur duurt; voor snel ontdooien, onder 45 °C gedurende niet langer dan 15 minuten, met continu schudden in een thermostatisch waterbad.
ISO/IEC 17025 neemt de behandeling van beproevingsitems op onder haar procesvereisten: het laboratorium moet elke afwijking van de gespecificeerde condities bij ontvangst van een monster registreren en, als de klant toch vraagt het te analyseren, in het rapport aangeven welke resultaten kunnen zijn beïnvloed. De ontvangstcriteria zijn een van de vragen die je aan elk laboratorium moet stellen, zoals gesuggereerd in het artikel over ISO/IEC 17025-accreditatie.
Veelgemaakte fouten
- Gekoelde producten invriezen om ze "beter te bewaren", wat de cellen beschadigt en de tellingen kan verlagen.
- Monsters op vrijdagmiddag opsturen naar een laboratorium dat in het weekend niet ontvangt.
- Wattenstaafjes of sponzen gebruiken zonder neutralisator die past bij het ontsmettingsmiddel van de fabriek.
- Gechloreerd water afnemen in flessen zonder thiosulfaat.
- Het tijdstip van afname niet registreren, waardoor niet kan worden aangetoond dat de maximale termijn tot de analyse is gerespecteerd.
- Monsters van eindproduct en van afvoeren in dezelfde doos stoppen zonder ze te scheiden of naar risico te etiketteren.
Conclusie
Een monster vertegenwoordigt alleen wat er in de fabriek was als het ongewijzigd in het laboratorium aankomt. De juiste verpakking kiezen, de temperatuur handhaven naargelang het type product, ontsmettingsmiddelen en chloor neutraliseren, de maximale termijnen respecteren en elke stap documenteren zijn eenvoudige maatregelen die bepalen of het resultaat bruikbaar is om beslissingen te nemen. Een goede analysemethode kan een monster dat onderweg is verslechterd niet corrigeren.
Over TAAG
Ontdek hoe de moleculaire detectiekits van TAAG helpen de tijd tussen de aankomst van het monster in het laboratorium en een bruikbaar resultaat te verkorten.
Veelgestelde vragen
Hoeveel tijd mag er verstrijken tussen het nemen van een gekoeld monster en de analyse ervan?
Het BAM van de FDA geeft aan dat, tenzij anders gespecificeerd, gekoelde monsters niet later dan 36 uur na afname geanalyseerd zouden moeten worden, bewaard bij 0-4 °C. Voor oppervlaktemonsters beveelt ISO 18593 aan ze bij voorkeur binnen 24 uur te onderzoeken.
Mag je een gekoeld monster invriezen om het te versturen?
Dat is niet aan te raden. Het BAM geeft uitdrukkelijk aan gekoelde producten niet in te vriezen, omdat invriezen een deel van de micro-organismen kan beschadigen of inactiveren en het resultaat kan veranderen.
Waarvoor dient de neutralisator in wattenstaafjes en sponzen?
Om de werking van de resten ontsmettingsmiddel die van het oppervlak zijn opgenomen te stoppen. Zonder kan het ontsmettingsmiddel tijdens het transport blijven werken en vals-negatieven veroorzaken. De neutralisator moet worden gekozen naar het type gebruikt ontsmettingsmiddel.
Waarom wordt natriumthiosulfaat aan watermonsters toegevoegd?
Om het restchloor te neutraliseren, dat bacteriën in de fles zou blijven inactiveren. ISO 19458 geeft aan dat thiosulfaat het monster niet beïnvloedt en ook bij niet-gechloreerd water kan worden gebruikt.