Teil der Säule mikrobiologische Probenahme des TAAG Learning Centers. Es ist der Schritt, der auf die Probenahme folgt, die im Leitfaden zu Oberflächen und in den attributiven Probenahmeplänen beschrieben ist.
Inhaltsverzeichnis
Die Probe verändert sich auch nach der Entnahme weiter
Zwischen dem Moment, in dem eine Probe entnommen wird, und dem Moment, in dem der Analytiker sie öffnet, können Stunden oder Tage vergehen. In dieser Zeit können sich Bakterien vermehren, wenn sich die Probe erwärmt, absterben, wenn ein Produkt eingefroren wird, das gekühlt reisen sollte, oder weiter einem Sanitizer ausgesetzt bleiben, der nicht neutralisiert wurde. Das Endergebnis beschreibt die Probe so, wie sie im Labor ankam, nicht unbedingt so, wie sie im Betrieb war.
Das Bacteriological Analytical Manual (BAM) der FDA sagt es unumwunden: Werden Proben unsachgemäß gesammelt, schlecht gehandhabt oder repräsentieren sie die Charge nicht, sind die Laborergebnisse sinnlos. Dieser Artikel fasst zusammen, was die wichtigsten Referenzen darüber sagen, wie die Probe vom Probenahmeort zum Tisch des Analytikers gelangt.
Behälter und Kennzeichnung
Das BAM empfiehlt, das Produkt wenn möglich in seiner ungeöffneten Originalverpackung zu senden. Ist das nicht möglich, sind Portionen aseptisch in saubere, trockene, sterile, dicht schließende Weithalsbehälter umzufüllen, wobei Glas vermieden werden sollte, da es brechen kann. Für trockene Produkte eignen sich sterile Beutel oder Dosen; sterile Kunststoffbeutel sollten nur mit trockenen, nicht gefrorenen Materialien verwendet werden. Einige konkrete Empfehlungen:
- Mindestens 100 g pro Probeneinheit gewinnen.
- Beutel nicht überfüllen und verhindern, dass Verschlussdrähte sie durchstechen.
- Jede Einheit mit beschriftetem Klebeband kennzeichnen; das BAM rät davon ab, mit Markern auf Kunststoff zu schreiben, da die Tinte hindurchdringen kann.
- Als Kontrolle einen leeren sterilen Behälter mitsenden, der denselben Bedingungen wie bei der Probenahme ausgesetzt war.
- Datum und Uhrzeit der Entnahme und des Eintreffens im Labor jeder Probe festhalten.
Temperatur je nach Produktart
Die allgemeine Regel des BAM lautet, die Proben so schnell wie möglich im Labor abzuliefern und dabei nach Möglichkeit ihre ursprünglichen Lagerbedingungen beizubehalten:
- Trockene oder nicht verderbliche Konserven: können bei Raumtemperatur transportiert werden.
- Gefrorene Produkte: müssen jederzeit vollständig gefroren bleiben, in vorgekühlten Behältern und starren Isolierbehältern.
- Gekühlte Produkte: werden auf Eis bei 0-4 °C gekühlt und in einer Box mit Kühlmittel transportiert, das diese Temperatur bis zur Ankunft halten kann. Sie dürfen nicht eingefroren werden. Sofern nicht anders angegeben, sollten sie nicht später als 36 Stunden nach der Entnahme analysiert werden.
- Weichtiere und Meeresfrüchte: haben eigene Bedingungen. Das BAM empfiehlt, sie idealerweise innerhalb von 6 Stunden und nie später als 24 Stunden nach der Entnahme zu untersuchen.
Bei flüssigen Proben schlägt das BAM vor, eine zusätzliche Einheit als Temperaturkontrolle zu entnehmen und ihre Temperatur bei der Probenahme und beim Eingang zu messen. Das ist eine einfache Möglichkeit, zu dokumentieren, dass die Kühlkette eingehalten wurde.
Oberflächenproben: der Neutralisator und die Uhr
Bei Tupfer- und Schwammproben kommt ein zusätzlicher Faktor hinzu: Desinfektionsmittelrückstände. Werden sie nicht neutralisiert, können sie während des Transports weiter Mikroorganismen inaktivieren und ein falsch negatives Ergebnis verursachen. Die Ausgabe 2004 von ISO 18593 wies bereits darauf hin, dass es keinen universellen Neutralisator gibt, und nannte einige gängige Optionen: Lecithin und Sorbitanmonooleat für quartäre Ammoniumverbindungen, Natriumthiosulfat für Produkte auf Halogenbasis sowie Katalase oder Peroxidase für Desinfektionsmittel auf Peroxidbasis. Der Neutralisator sollte nach dem im Betrieb verwendeten Sanitizer gewählt werden, wie im Leitfaden zur Verifizierung von Oberflächen nach der Sanitisierung erläutert.
Die aktuelle Fassung, ISO 18593:2018, ist die Referenz, die die Verordnung (EG) 2073/2005 für die Probenahme von Prozessbereichen und Ausrüstung festlegt. Sie sieht vor, die Proben gekühlt zwischen 1 °C und 8 °C zu transportieren und vorzugsweise innerhalb von 24 Stunden nach der Entnahme zu untersuchen. Für Tierschlachtkörper verweist dieselbe Verordnung auf ISO 17604, die die Probenahmemethoden sowie die Regeln für Lagerung und Transport beschreibt.
Wasserproben: das Restchlor
Gechlortes Wasser wirft dasselbe Problem auf wie sanitisierte Oberflächen: Das Chlor wirkt im Probenfläschchen weiter. ISO 19458:2006, die Norm zur Wasserprobenahme für mikrobiologische Analysen, sieht vor, den Fläschchen vor der Probenahme Natriumthiosulfat zuzugeben. Nach der Norm werden 7,1 mg Natriumthiosulfat-Pentahydrat benötigt, um 1 mg Chlor zu inaktivieren, und die übliche Dosis beträgt 0,1 mL einer Lösung von 18 mg/mL je 100 mL Fassungsvermögen des Fläschchens. Bei höheren Chlorkonzentrationen ist eine größere Dosis nötig. Die Norm stellt klar, dass das Thiosulfat die Probe nicht beeinträchtigt und auch bei nicht gechlortem Wasser verwendet werden kann. Die Interpretation der Wasserindikatoren wird im Artikel zu Coliformen, E. coli und Enterokokken im Wasser behandelt.
Den Versand vor der Probenahme planen
Ein großer Teil der Transportprobleme lässt sich vermeiden, bevor die erste Probe entnommen wird. Das BAM empfiehlt, das Labor beim Versand verderblicher Proben im Voraus zu informieren, und diese Abstimmung ermöglicht es, drei Dinge zu klären: dass das Labor die Proben innerhalb der Höchstzeit annehmen und verarbeiten kann, welches Volumen oder Gewicht es für jede Analyse benötigt und welche Annahmekriterien es beim Eingang anwenden wird. Ebenso sollte man festlegen, wer während des Transports für die Box verantwortlich ist, wo die Temperatur dokumentiert wird und wie Proben unterschiedlichen Risikos getrennt werden, etwa Fertigprodukt und Abflussproben, um Kreuzkontamination zwischen ihnen zu vermeiden.
Der Eingang im Labor
Die Kontrolle endet nicht an der Labortür. Das BAM beschreibt einen Probeneingang mit klaren Schritten:
- Zustand der Verpackung prüfen: Brüche, Löcher, lockere Deckel oder durchstochene Beutel machen die Probe wegen des Risikos der Kreuzkontamination ungültig.
- Kennzeichnung und Aufzeichnungen prüfen: Jede Einheit muss gekennzeichnet und mit ihrer Dokumentation ankommen, bei amtlichen Proben zudem versiegelt.
- Probenahmeplan abgleichen: dass die Zahl der Einheiten entnommen wurde, die der beauftragten Analyse entspricht.
- Lagern, wenn nicht sofort analysiert wird: gefrorene Proben bei −20 °C, verderbliche gekühlt bei 0-4 °C für nicht länger als 36 Stunden und nicht verderbliche oder feuchtearme Produkte bei Raumtemperatur.
- Den Probenehmer informieren, wenn die Probe die Bedingungen nicht erfüllt, um eine gültige Probe zu erhalten und zu verhindern, dass sich das Problem wiederholt.
Auftauen, ohne die Probe zu verändern
Das BAM bevorzugt, vor der Analyse nicht aufzutauen. Falls nötig, empfiehlt es, in der Originalverpackung bei 2-5 °C aufzutauen, was normalerweise bis zu 18 Stunden dauert; für schnelles Auftauen unter 45 °C für höchstens 15 Minuten, unter ständigem Schütteln im temperierten Wasserbad.
ISO/IEC 17025 nimmt die Handhabung der Prüfgegenstände in ihre Prozessanforderungen auf: Das Labor muss jede Abweichung von den festgelegten Bedingungen beim Eingang einer Probe dokumentieren und, falls der Kunde sie dennoch analysiert haben möchte, im Bericht angeben, welche Ergebnisse betroffen sein könnten. Die Annahmekriterien gehören zu den Fragen, die man jedem Labor stellen sollte, wie im Artikel zur Akkreditierung nach ISO/IEC 17025 vorgeschlagen.
Häufige Fehler
- Gekühlte Produkte einzufrieren, um sie „besser zu konservieren“, was die Zellen schädigt und die Zählwerte senken kann.
- Proben an einem Freitagnachmittag an ein Labor zu schicken, das am Wochenende keine Proben annimmt.
- Tupfer oder Schwämme ohne einen zum Sanitizer des Betriebs passenden Neutralisator zu verwenden.
- Gechlortes Wasser in Fläschchen ohne Thiosulfat zu entnehmen.
- Die Entnahmezeit nicht zu dokumentieren, sodass sich nicht belegen lässt, dass die Höchstzeit bis zur Analyse eingehalten wurde.
- Fertigprodukt- und Abflussproben in dieselbe Box zu legen, ohne sie nach Risiko zu trennen oder zu kennzeichnen.
Fazit
Eine Probe repräsentiert nur dann, was im Betrieb vorhanden war, wenn sie unverändert im Labor ankommt. Den richtigen Behälter zu wählen, die Temperatur je nach Produktart zu halten, Sanitizer und Chlor zu neutralisieren, die Höchstzeiten einzuhalten und jeden Schritt zu dokumentieren sind einfache Maßnahmen, die entscheiden, ob das Ergebnis für Entscheidungen taugt. Eine gute Analysemethode kann eine Probe nicht korrigieren, die unterwegs verdorben ist.
Über TAAG
Erfahren Sie, wie die molekularen Nachweiskits von TAAG helfen, die Zeit zwischen dem Eintreffen der Probe im Labor und einem umsetzbaren Ergebnis zu verkürzen.
Häufig gestellte Fragen
Wie viel Zeit darf zwischen der Entnahme einer gekühlten Probe und ihrer Analyse vergehen?
Das BAM der FDA gibt an, dass gekühlte Proben, sofern nichts anderes angegeben ist, nicht später als 36 Stunden nach der Entnahme analysiert werden sollten, bei Lagerung bei 0-4 °C. Für Oberflächenproben empfiehlt ISO 18593, sie vorzugsweise innerhalb von 24 Stunden zu untersuchen.
Darf man eine gekühlte Probe für den Versand einfrieren?
Das ist nicht empfehlenswert. Das BAM weist ausdrücklich darauf hin, gekühlte Produkte nicht einzufrieren, da das Einfrieren einen Teil der Mikroorganismen schädigen oder inaktivieren und das Ergebnis verändern kann.
Wozu dient der Neutralisator bei Tupfern und Schwämmen?
Er stoppt die Wirkung der von der Oberfläche aufgenommenen Desinfektionsmittelreste. Ohne ihn kann der Sanitizer während des Transports weiter wirken und falsch negative Ergebnisse verursachen. Der Neutralisator ist nach der Art des verwendeten Desinfektionsmittels zu wählen.
Warum wird Wasserproben Natriumthiosulfat zugegeben?
Um das Restchlor zu neutralisieren, das im Fläschchen weiter Bakterien inaktivieren würde. ISO 19458 gibt an, dass das Thiosulfat die Probe nicht beeinträchtigt und auch bei nicht gechlortem Wasser verwendet werden kann.