Come scegliere un kit TAAG in base al tuo settore, alla tua matrice e al microrganismo che cerchi

Partire dalla decisione, non dal catalogo

Il catalogo dei kit TAAG riunisce decine di prodotti in tre linee: Ampliora, Elevia e Specio. Di fronte a quell'elenco, la tentazione è cercare il nome del patogeno e scegliere il primo kit che lo menziona. È una scorciatoia che spesso fallisce, perché un kit non si definisce solo da ciò che rileva, ma anche da dove è convalidato per rilevarlo e da quanto tempo impiega a dare un risultato.

Questa guida propone di ordinare la scelta in tre domande e poi mostra, settore per settore, quali kit del catalogo pubblicato corrispondono a ciascun caso. Tutte le informazioni sui kit provengono dal catalogo TAAG e da taag.bio; non sostituiscono la scheda tecnica di ciascun prodotto né un confronto con il team tecnico.

Domanda 1: che tipo di microrganismo cerchi?

Il catalogo raggruppa i kit in tre tipi di saggio, che rispondono a obiettivi diversi del programma di qualità:

• Patogeni: Salmonella, Listeria, E. coli e STEC, Staphylococcus aureus o Vibrio. Sono quelli che stabiliscono se un prodotto è sicuro.
• Deterioramento: lieviti, muffe e batteri che alterano bevande, succhi, birra o vino. Non fanno ammalare il consumatore, ma generano resi e perdite.
• Indicatori: i pannelli WaterScan per l'acqua, che cercano gruppi come E. coli, Citrobacter, Klebsiella, Enterococcus ed Enterobacter.

All'interno di ciascun tipo ci sono kit singoli (un bersaglio) e multiplex (più bersagli nella stessa reazione). Un kit multiplex ha senso quando il tuo piano di campionamento richiede già di cercare quei microrganismi insieme nello stesso campione; se te ne serve uno solo, il kit singolo di solito è sufficiente.

Domanda 2: in quale matrice?

È la domanda più sottovalutata. Ogni kit dichiara le matrici per le quali è stato sviluppato o convalidato, e tali matrici possono essere molto specifiche o piuttosto generali:

• Specifiche: Elevia 1.1 Salmonella spp. elenca cioccolatini ripieni di tipo nocciola e di tipo latte, barretta di cioccolato con arachidi, crema di nocciole e cacao, carne in muscolo intero, carne bovina macinata (90 % magra), pellet di mangime per animali, uova liquide pastorizzate e superfici in acciaio inossidabile. Ampliora 3.10 elenca gamberi con e senza guscio.
• Generali: molti kit Specio, come Specio 1.1 Salmonella spp. o Specio 2.3 Listeria spp. e L. monocytogenes, descrivono il proprio campo di applicazione come "alimenti, bevande e superfici vive e inerti".

Una descrizione generale non equivale a una convalida sul tuo prodotto. Prima di usare un risultato per rilasciare un lotto, il laboratorio deve confermare nella documentazione tecnica del kit se la sua matrice è coperta e, in ogni caso, verificare il metodo nelle proprie condizioni. ISO 16140-3 organizza tale verifica in due fasi: una verifica di implementazione, che dimostra che il laboratorio esegue correttamente il metodo con un item, e una verifica degli item, che si fa con alimenti "impegnativi" delle categorie che il laboratorio analizza realmente. Lo spieghiamo in dettaglio in convalida e verifica dei metodi.

La certificazione AOAC è un caso particolare dello stesso principio. Secondo il catalogo, tre kit la possiedono: Elevia 1.1 Salmonella spp. (estensione di licenza n. 072601), Ampliora 3.9 (estensione di licenza n. 032501) e Specio 4.1 (estensione di licenza n. 072101). Ciascuna certificazione copre le matrici valutate in quello studio, come spieghiamo in che cos'è la certificazione AOAC-PTM.

Domanda 3: quando devi decidere?

La terza domanda separa le linee per chimica, come illustrato in Ampliora, Elevia e Specio. L'esploratore di prodotti di taag.bio pubblica tempi approssimativi di flusso completo per kit, ad esempio:

• Kit Ampliora con arricchimento, come Ampliora 1.1 Salmonella spp., Ampliora 1.3 E. coli o Ampliora 2.8: circa 26,5 ore.
• Pannelli WaterScan (3.11, 3.12 e 6.1): circa 17,8 ore.
• Kit Elevia, costruiti sulla tecnologia a RNA AiGOR™: circa 2,3 ore per Elevia 1.1, 5,3 ore per Elevia 2.9 e 6,4 ore per Elevia 2.8.

La pagina di AiGOR precisa che i tempi dipendono dal tipo di campione: da 3 ore per i campioni ambientali e da 7 a 9 ore per la maggior parte delle matrici di prodotto finito. Se il risultato alimenta una decisione che può attendere il giorno dopo, come il controllo di routine di un indicatore, il flusso con arricchimento è sufficiente. Se la decisione è riavviare una linea dopo la pulizia o rilasciare un lotto nello stesso turno, il tempo diventa un criterio di scelta.

Guida per settore

Gli esempi che seguono incrociano i settori e le matrici dichiarati nel catalogo TAAG. Non sono elenchi esaustivi né raccomandazioni d'uso: sono un punto di partenza per consultare la scheda di ciascun kit.

Carni e avicolo

• Carne cruda e salumi: Ampliora 1.1 Salmonella spp. dichiara pollo crudo, hamburger di manzo congelato, salsiccia, mortadella e superfici.
• Carne macinata e STEC: Ampliora 3.9 (F39) cerca STEC, E. coli O157:H7 e Salmonella spp. in carne macinata di manzo e foglie verdi, con certificazione AOAC. Specio 2.4 copre E. coli ed E. coli O157:H7 in carne, latticini e alimenti preparati.
• Affettati e carni stagionate: Ampliora 3.2 e Specio 3.2 combinano Salmonella spp., L. monocytogenes ed E. coli O157:H7; Ampliora 3.5 combina Salmonella spp., L. monocytogenes e Listeria spp. Elevia 2.8 dichiara prodotti a base di carne trasformati oltre alle superfici in acciaio inossidabile.

Il contesto di rischio di questo settore lo approfondiamo in microbiologia nell'industria della carne.

Latticini

• Ampliora 3.2, Ampliora 3.5 e Specio 3.2 includono i latticini tra le loro matrici.
• Specio 4.1, che combina Salmonella spp., L. monocytogenes, E. coli e S. aureus, è certificato AOAC con latte liquido pastorizzato al 2 % di grassi tra le sue matrici.
• Elevia 1.1 include il latte scremato in polvere, un alimento a bassa umidità, nell'ambito della sua certificazione AOAC.
• Per il deterioramento, Specio 00.1 Bacteria (oltre 80 batteri) e Specio 00.2 Yeast & Molds (oltre 50 lieviti e muffe) elencano latte naturale, scremato, fortificato e al cioccolato, e panna.

Dolciario e alimenti a bassa umidità

Elevia 1.1 Salmonella spp. è il kit del catalogo con matrici di questo gruppo: TAAG lo ha convalidato in cioccolatini ripieni di tipo nocciola e di tipo latte, barretta di cioccolato con arachidi e crema di nocciole e cacao, e la sua certificazione AOAC copre cioccolato al 62 % di cacao, liquore di cacao, latte scremato in polvere e arachidi. Le altre varietà di frutta secca non compaiono in nessuno dei due elenchi. Il motivo per cui Salmonella è il patogeno chiave in queste matrici lo spieghiamo in Salmonella negli alimenti a bassa umidità.

Frutta e verdura fresche

• Ampliora 1.3 E. coli: ortaggi a foglia verde e superfici.
• Ampliora 3.9 (F39): cavolo, lattuga, spinaci e mix di foglie verdi.
• Specio 4.1: lattuga, tra le sue matrici certificate.
• Verdure surgelate: Ampliora 3.5 e Specio 1.8 Listeria spp.

Bevande e succhi

• Bevande a pH basso: Ampliora 4.7 cerca batteri acidofili, Brettanomyces, lieviti resistenti ai conservanti e lieviti e muffe di deterioramento in acqua imbottigliata e aromatizzata, bevande isotoniche e gassate, succhi, concentrato di frutta e tè pronto da bere.
• Concentrati di frutta: Ampliora 2.10 rileva Alicyclobacillus e geni produttori di guaiacolo; Ampliora 3.13 aggiunge Zygosaccharomyces spp.
• Zygosaccharomyces: Specio 1.7 rileva Z. bailii e Z. parabailii in bevande, polpe e superfici.
• Deterioramento non identificato: Specio 00.1 e 00.2, con cola, acqua gassata e non gassata, succo d'arancia e purea di frutta tra le loro matrici.

Perché nelle bevande il deterioramento pesa di solito più dei patogeni lo raccontiamo in microbiologia nelle bevande.

Birrificio e vino

• Lieviti nella birra: Ampliora 4.3 (Zygosaccharomyces e Saccharomyces), Ampliora 4.4 (Brettanomyces, Pichia e S. cerevisiae var. diastaticus) e Ampliora 8.1 Yeast Plus, che riunisce i bersagli di entrambi.
• Batteri nella birra: Ampliora 4.5 (gruppo Lactobacillus e Pediococcus), Ampliora 4.6 (Pectinatus, Megasphaera e altri lattobacilli) e Ampliora 8.2 Bacteria Plus, che riunisce quelli di entrambi.
• Vino: Ampliora 3.15 rileva il gruppo Zygosaccharomyces, Saccharomyces spp. e S. cerevisiae nel vino e sulle superfici.

Pesca e acquacoltura

Ampliora 3.10 rileva Vibrio cholerae, V. vulnificus e V. parahaemolyticus in gamberi con e senza guscio.

Acqua

Ampliora 3.11 WaterScan (E. coli, Citrobacter e Klebsiella), Ampliora 3.12 WaterScan (Enterococcus, Enterobacter ed Escherichia) e Ampliora 6.1 WaterScan Plus, che combina i sei gruppi. Che cosa rivela ciascun indicatore lo spieghiamo in coliformi, E. coli ed enterococchi nell'acqua.

Superfici e monitoraggio ambientale

Diversi kit dichiarano le superfici. Nella linea Elevia, Elevia 1.1 (Salmonella spp.), Elevia 2.8 (Salmonella spp. e Listeria spp.) ed Elevia 2.9 (Salmonella spp. ed Enterobatteri) dichiarano superfici in acciaio inossidabile e, secondo taag.bio, il protocollo di Elevia 2.8 e 2.9 accetta tamponi e spugne prelevati prima o dopo la sanificazione. La logica di monitorare Enterobatteri e Salmonella insieme dopo la pulizia è in questo articolo.

Il kit è una parte del flusso

L'esploratore di prodotti di taag.bio non elenca solo kit PCR: include anche kit di estrazione, terreni di coltura, supplementi di terreno e kit di campionamento, e permette di filtrare per settore, tipo di prodotto e microrganismo. Scegliere un kit di rilevamento senza verificare come si preleva il campione, come si prepara e come si estrae il materiale genetico lascia fuori fasi che pesano quanto la chimica di rilevamento.

All'altro estremo, TxA interpreta i risultati dei kit delle tre linee e, secondo taag.bio, collega il campionamento digitale in stabilimento, i risultati del laboratorio e i report in un'unica piattaforma. Se il laboratorio elabora molti campioni, anche il modo in cui i risultati vengono registrati e letti fa parte della decisione.

Errori frequenti nella scelta

• Scegliere solo in base al nome del microrganismo, senza verificare la matrice né il tempo di risposta.
• Dare per scontato che "alimenti" includa il tuo prodotto senza consultare la documentazione tecnica né verificare il metodo nel tuo laboratorio.
• Scegliere un multiplex per sicurezza, quando il piano di campionamento richiede un solo bersaglio.
• Dimenticare la conferma. Un positivo di screening percorre un cammino prima di diventare un risultato confermato, come spieghiamo in risultato presunto vs. confermato.