Parte do pilar de amostragem microbiológica do Centro de Aprendizagem TAAG. É o passo que segue a coleta de amostras descrita no guia de superfícies e em planos de amostragem por atributos.
Índice do artigo
A amostra continua mudando depois de coletada
Entre o momento em que uma amostra é coletada e o momento em que o analista a abre podem passar horas ou dias. Nesse intervalo, as bactérias podem se multiplicar se a amostra esquentar, morrer se for congelado um produto que devia viajar refrigerado, ou seguir expostas a um sanitizante que não foi neutralizado. O resultado final descreve a amostra tal como chegou ao laboratório, não necessariamente como estava na planta.
O Manual Bacteriológico Analítico (BAM) da FDA coloca isso sem rodeios: se as amostras são coletadas de forma inadequada, mal manipuladas ou não representam o lote, os resultados do laboratório não têm sentido. Este artigo reúne o que dizem as principais referências sobre como levar a amostra do ponto de amostragem até a bancada do analista.
Embalagens e rotulagem
O BAM recomenda enviar, sempre que possível, o produto em sua embalagem original sem abrir. Quando isso não é possível, as porções devem ser transferidas de forma asséptica para recipientes limpos, secos, estéreis, herméticos e de boca larga, evitando o vidro, que pode quebrar. Para produtos secos servem sacos ou latas estéreis; os sacos plásticos estéreis só devem ser usados com materiais secos e não congelados. Algumas recomendações concretas:
- Obter pelo menos 100 g por unidade de amostra.
- Não encher demais os sacos e evitar que os arames de fechamento os perfurem.
- Identificar cada unidade com fita rotulada; o BAM desaconselha escrever com marcador sobre plástico porque a tinta pode atravessá-lo.
- Enviar como controle uma embalagem estéril vazia exposta às mesmas condições da amostragem.
- Registrar data e hora da coleta e da chegada ao laboratório de cada amostra.
Temperatura conforme o tipo de produto
A regra geral do BAM é entregar as amostras ao laboratório o quanto antes e mantendo, na medida do possível, suas condições originais de armazenamento:
- Produtos secos ou enlatados não perecíveis: podem viajar à temperatura ambiente.
- Produtos congelados: devem ser mantidos completamente congelados o tempo todo, em embalagens pré-resfriadas e contêineres isolados rígidos.
- Produtos refrigerados: são resfriados em gelo a 0-4 °C e transportados em uma caixa com refrigerante capaz de manter essa temperatura até a chegada. Não devem ser congelados. Salvo indicação diferente, não deveriam ser analisados mais de 36 horas após a coleta.
- Moluscos e frutos do mar: têm condições próprias. O BAM indica examiná-los idealmente dentro de 6 horas e nunca mais de 24 horas após a coleta.
Para amostras líquidas, o BAM sugere coletar uma unidade adicional como controle de temperatura e medi-la ao coletar a amostra e ao recebê-la. É uma forma simples de documentar que a cadeia de frio foi mantida.
Amostras de superfícies: o neutralizante e o relógio
Nas amostras de swabs e esponjas há um fator adicional: os resíduos de desinfetante. Se não forem neutralizados, podem continuar inativando microrganismos durante o transporte e gerar um falso negativo. A edição de 2004 da ISO 18593 já assinalava que não existe um neutralizante universal e mencionava algumas opções habituais: lecitina e monooleato de sorbitano para compostos de amônio quaternário, tiossulfato de sódio para produtos à base de halogênios, e catalase ou peroxidase para desinfetantes à base de peróxidos. Convém escolher o neutralizante conforme o sanitizante que a planta usa, como se comenta no guia sobre verificação de superfícies pós-sanitização.
A versão vigente, ISO 18593:2018, é a referência que o Regulamento (CE) 2073/2005 fixa para a amostragem de áreas e equipamentos de processo. Indica transportar as amostras refrigeradas, entre 1 °C e 8 °C, e examiná-las de preferência dentro de 24 horas após a coleta. Para carcaças de animais, o mesmo regulamento remete à ISO 17604, que descreve os métodos de amostragem e as regras de armazenamento e transporte.
Amostras de água: o cloro residual
A água clorada apresenta o mesmo problema que as superfícies sanitizadas: o cloro segue agindo dentro do frasco. A ISO 19458:2006, a norma de amostragem de água para análise microbiológica, indica adicionar tiossulfato de sódio aos frascos antes de coletar a amostra. Segundo a norma, são necessários 7,1 mg de tiossulfato de sódio pentaidratado para inativar 1 mg de cloro, e a dose habitual é 0,1 mL de uma solução de 18 mg/mL para cada 100 mL de capacidade do frasco. Com concentrações de cloro mais altas é necessária uma dose maior. A norma esclarece que o tiossulfato não afeta a amostra e pode ser usado também em águas não cloradas. A interpretação dos indicadores de água é desenvolvida no artigo sobre coliformes, E. coli e enterococos na água.
Planejar o envio antes de amostrar
Boa parte dos problemas de transporte se evita antes de coletar a primeira amostra. O BAM recomenda avisar o laboratório com antecedência quando se enviam amostras perecíveis, e essa coordenação permite confirmar três coisas: que o laboratório poderá receber e processar as amostras dentro do tempo máximo, que volume ou peso precisa para cada análise e que critérios de aceitação aplicará no recebimento. Convém também definir quem é responsável pela caixa durante o trajeto, onde se registra a temperatura e como se separam as amostras de risco distinto, por exemplo produto acabado e amostras de ralos, para evitar contaminação cruzada entre elas.
O recebimento no laboratório
O controle não termina na porta do laboratório. O BAM descreve um recebimento com passos claros:
- Revisar o estado da embalagem: rupturas, perfurações, tampas frouxas ou sacos furados invalidam a amostra por risco de contaminação cruzada.
- Verificar rotulagem e registros: cada unidade deve chegar identificada, com sua documentação e, em amostras oficiais, lacrada.
- Conferir o plano de amostragem: que tenha sido coletado o número de unidades correspondente à análise solicitada.
- Armazenar se não for analisada de imediato: congelados a −20 °C, perecíveis refrigerados a 0-4 °C por não mais de 36 horas e produtos não perecíveis ou de baixa umidade à temperatura ambiente.
- Avisar quem coletou a amostra quando ela não cumpre as condições, para obter uma amostra válida e evitar que o problema se repita.
Descongelar sem alterar a amostra
O BAM prefere não descongelar antes da análise. Se for necessário, recomenda fazê-lo na embalagem original, a 2-5 °C, o que normalmente leva até 18 horas; para um descongelamento rápido, abaixo de 45 °C por não mais de 15 minutos, com agitação contínua em banho termostatizado.
A ISO/IEC 17025 inclui o manuseio dos itens de ensaio entre seus requisitos de processo: o laboratório deve registrar qualquer desvio das condições especificadas ao receber uma amostra e, se mesmo assim o cliente pedir para analisá-la, indicar no laudo quais resultados podem ser afetados. Os critérios de recebimento são uma das perguntas que convém fazer a qualquer laboratório, como se sugere no artigo sobre acreditação ISO/IEC 17025.
Erros frequentes
- Congelar produtos refrigerados para "conservá-los melhor", o que danifica as células e pode reduzir as contagens.
- Enviar amostras em uma sexta-feira à tarde a um laboratório que não recebe aos fins de semana.
- Usar swabs ou esponjas sem neutralizante adequado ao sanitizante da planta.
- Coletar água clorada em frascos sem tiossulfato.
- Não registrar a hora da coleta, o que impede demonstrar que o tempo máximo até a análise foi respeitado.
- Colocar na mesma caixa amostras de produto acabado e de ralos sem separá-las nem rotulá-las por risco.
Conclusão
Uma amostra só representa o que havia na planta se chegar ao laboratório sem alterações. Escolher a embalagem correta, manter a temperatura conforme o tipo de produto, neutralizar sanitizantes e cloro, respeitar os tempos máximos e documentar cada passo são medidas simples que definem se o resultado serve para tomar decisões. Um bom método de análise não pode corrigir uma amostra que se degradou no caminho.
Sobre a TAAG
Conheça como os kits de detecção molecular da TAAG ajudam a encurtar o tempo entre a chegada da amostra ao laboratório e um resultado acionável.
Perguntas frequentes
Quanto tempo pode passar entre a coleta de uma amostra refrigerada e sua análise?
O BAM da FDA indica que, salvo se especificado de outra forma, as amostras refrigeradas não deveriam ser analisadas mais de 36 horas após a coleta, mantendo-as a 0-4 °C. Para amostras de superfícies, a ISO 18593 recomenda examiná-las de preferência dentro de 24 horas.
Pode-se congelar uma amostra refrigerada para enviá-la?
Não é recomendável. O BAM indica expressamente não congelar os produtos refrigerados, porque o congelamento pode danificar ou inativar parte dos microrganismos e alterar o resultado.
Para que serve o neutralizante em swabs e esponjas?
Para interromper a ação dos restos de desinfetante recolhidos da superfície. Sem ele, o sanitizante pode continuar agindo durante o transporte e produzir falsos negativos. O neutralizante deve ser escolhido conforme o tipo de desinfetante usado.
Por que se adiciona tiossulfato de sódio às amostras de água?
Para neutralizar o cloro residual, que continuaria inativando bactérias dentro do frasco. A ISO 19458 indica que o tiossulfato não afeta a amostra e pode ser usado também em águas não cloradas.