הובלה ושימור של דגימות מיקרוביולוגיות: מנקודת הדגימה ועד המעבדה

הדגימה ממשיכה להשתנות גם אחרי שנלקחה

בין הרגע שבו נלקחת דגימה לרגע שבו האנליסט פותח אותה יכולות לעבור שעות או ימים. במרווח הזה, חיידקים יכולים להתרבות אם הדגימה מתחממת, למות אם מקפיאים מוצר שהיה אמור להיות מוסע בקירור, או להמשיך להיחשף לחומר חיטוי שלא נוטרל. התוצאה הסופית מתארת את הדגימה כפי שהגיעה למעבדה, ולאו דווקא כפי שהייתה במפעל.

המדריך האנליטי הבקטריולוגי (BAM) של ה-FDA מציג זאת בלי כחל ושרק: אם דגימות נאספות באופן לא הולם, מטופלות בצורה גרועה או אינן מייצגות את האצווה, תוצאות המעבדה חסרות משמעות. מאמר זה מרכז מה אומרים הייחוסים העיקריים על הבאת הדגימה מנקודת הדגימה אל שולחן האנליסט.

מיכלים וסימון

ה-BAM ממליץ לשלוח, בכל מקום שאפשר, את המוצר באריזתו המקורית הסגורה. כשזה אינו אפשרי, יש להעביר את המנות באופן אספטי למיכלים נקיים, יבשים, סטריליים, אטומים ורחבי פתח, תוך הימנעות מזכוכית העלולה להישבר. למוצרים יבשים מתאימים שקיות או פחיות סטריליות; שקיות פלסטיק סטריליות מיועדות רק לחומרים יבשים ולא קפואים. כמה המלצות קונקרטיות:

• לקחת לפחות 100 גרם ליחידת דגימה.
• לא למלא יתר על המידה את השקיות ולמנוע מחוטי הסגירה לנקב אותן.
• לזהות כל יחידה בסרט מסומן; ה-BAM אינו ממליץ לכתוב בטוש על פלסטיק משום שהדיו יכול לחדור דרכו.
• לשלוח כבקרה מיכל סטרילי ריק שנחשף לאותם תנאים כמו הדגימה.
• לרשום תאריך ושעה של הלקיחה ושל ההגעה למעבדה לכל דגימה.

טמפרטורה לפי סוג המוצר

הכלל הכללי של ה-BAM הוא למסור את הדגימות למעבדה בהקדם האפשרי ולשמור, ככל שאפשר, על תנאי האחסון המקוריים שלהן:

• מוצרים יבשים או משומרים לא מתכלים: יכולים להיות מוסעים בטמפרטורת החדר.
• מוצרים קפואים: חייבים להישמר קפואים לחלוטין בכל עת, במיכלים שהוקררו מראש ובמכלי בידוד קשיחים.
• מוצרים מקוררים: מקררים בקרח ל-0-4 °C ומובילים בקופסה עם חומר קירור המסוגל לשמור על טמפרטורה זו עד ההגעה. אסור להקפיא אותם. אלא אם צוין אחרת, אין לנתח אותם יותר מ-36 שעות לאחר הלקיחה.
• רכיכות ופירות ים: יש להם תנאים משלהם. ה-BAM מורה לבדוק אותם באופן אידיאלי בתוך 6 שעות ולעולם לא יותר מ-24 שעות לאחר הלקיחה.

לדגימות נוזליות, ה-BAM מציע לקחת יחידה נוספת כבקרת טמפרטורה ולמדוד אותה בעת לקיחת הדגימה ובעת קבלתה. זוהי דרך פשוטה לתעד ששרשרת הקירור נשמרה.

דגימות משטחים: המנטרל והשעון

בדגימות מספוגיות וספוגים יש גורם נוסף: שאריות חומר חיטוי. אם לא מנטרלים אותן, הן יכולות להמשיך להשבית מיקרואורגניזמים בזמן ההובלה ולגרום לתוצאה שלילית כוזבת. מהדורת 2004 של ISO 18593 כבר ציינה שאין מנטרל אוניברסלי והזכירה כמה אפשרויות נפוצות: לציתין וסורביטן מונואולאט לתרכובות אמוניום רבעוני, נתרן תיוסולפט למוצרים על בסיס הלוגנים, וקטלאז או פרוקסידאז לחומרי חיטוי על בסיס פרוקסידים. כדאי לבחור את המנטרל לפי חומר החיטוי שבו משתמש המפעל, כפי שמוסבר במדריך על אימות משטחים לאחר חיטוי.

הגרסה התקפה, ISO 18593:2018, היא הייחוס שתקנה (EC) 2073/2005 קובעת לדגימת אזורים וציוד תהליך. היא מורה להוביל את הדגימות בקירור, בין 1 °C ל-8 °C, ולבדוק אותן רצוי בתוך 24 שעות מהלקיחה. לגבי פגרי בעלי חיים, אותה תקנה מפנה ל-ISO 17604, המתאר את שיטות הדגימה ואת כללי האחסון וההובלה.

דגימות מים: כלור שיורי

מים מוכלרים מציבים את אותה בעיה כמו משטחים מחוטאים: הכלור ממשיך לפעול בתוך הבקבוק. ISO 19458:2006, תקן הדגימה של מים לניתוח מיקרוביולוגי, מורה להוסיף נתרן תיוסולפט לבקבוקים לפני לקיחת הדגימה. לפי התקן, דרושים 7.1 מ"ג נתרן תיוסולפט פנטהידראט כדי להשבית 1 מ"ג כלור, והמינון הרגיל הוא 0.1 מ"ל מתמיסה של 18 מ"ג/מ"ל לכל 100 מ"ל נפח הבקבוק. בריכוזי כלור גבוהים יותר נדרש מינון גדול יותר. התקן מבהיר שהתיוסולפט אינו משפיע על הדגימה וניתן להשתמש בו גם במים לא מוכלרים. פירוש מדדי המים מפורט במאמר על קוליפורמים, E. coli ואנטרוקוקים במים.

תכנון המשלוח לפני הדגימה

חלק גדול מבעיות ההובלה נמנעות לפני שלוקחים את הדגימה הראשונה. ה-BAM ממליץ להודיע למעבדה מראש כששולחים דגימות מתכלות, והתיאום הזה מאפשר לאשר שלושה דברים: שהמעבדה תוכל לקבל ולעבד את הדגימות בתוך הזמן המרבי, איזה נפח או משקל היא צריכה לכל ניתוח ואילו קריטריוני קבלה תחיל בקליטה. כדאי גם להגדיר מי אחראי על הקופסה במהלך המסע, היכן נרשמת הטמפרטורה וכיצד מפרידים בין דגימות בסיכון שונה, למשל מוצר מוגמר ודגימות ניקוז, כדי למנוע זיהום צולב ביניהן.

הקליטה במעבדה

הבקרה אינה מסתיימת בדלת המעבדה. ה-BAM מתאר קליטה עם שלבים ברורים:

• לבדוק את מצב המיכל: קרעים, נקבים, מכסים רופפים או שקיות מנוקבות פוסלים את הדגימה בשל סיכון לזיהום צולב.
• לאמת סימון ורישומים: כל יחידה חייבת להגיע מזוהה, עם התיעוד שלה ובדגימות רשמיות, חתומה.
• לבדוק את תוכנית הדגימה: שנלקח מספר היחידות המתאים לניתוח המבוקש.
• לאחסן אם אינם מנתחים מיד: קפואים בטמפרטורה של מינוס 20 °C, מתכלים מקוררים ב-0-4 °C לא יותר מ-36 שעות, ומוצרים לא מתכלים או בעלי לחות נמוכה בטמפרטורת החדר.
• להודיע למי שלקח את הדגימה כשהיא אינה עומדת בתנאים, כדי להשיג דגימה תקפה ולמנוע חזרה של הבעיה.

הפשרה ללא שינוי הדגימה

ה-BAM מעדיף לא להפשיר לפני הניתוח. אם יש צורך, הוא ממליץ לעשות זאת באריזה המקורית, ב-2-5 °C, מה שלוקח בדרך כלל עד 18 שעות; להפשרה מהירה, מתחת ל-45 °C לא יותר מ-15 דקות, עם ערבול רציף באמבט תרמוסטטי.

ISO/IEC 17025 כולל את הטיפול בפריטי הבדיקה בין דרישות התהליך שלו: על המעבדה לרשום כל סטייה מהתנאים שצוינו בעת קבלת דגימה, ואם הלקוח בכל זאת מבקש לנתח אותה, לציין בדוח אילו תוצאות עלולות להיפגע. קריטריוני הקליטה הם אחת השאלות שכדאי לשאול כל מעבדה, כפי שמוצע במאמר על הסמכת ISO/IEC 17025.

טעויות נפוצות

• להקפיא מוצרים מקוררים כדי "לשמר אותם טוב יותר", מה שפוגע בתאים ועלול להקטין את הספירות.
• לשלוח דגימות ביום שישי אחר הצהריים למעבדה שאינה מקבלת בסופי שבוע.
• להשתמש בספוגיות או בספוגים ללא מנטרל המתאים לחומר החיטוי של המפעל.
• לדגום מים מוכלרים בבקבוקים ללא תיוסולפט.
• לא לרשום את שעת הלקיחה, מה שמונע להוכיח שהזמן המרבי עד הניתוח נשמר.
• לשים באותה קופסה דגימות של מוצר מוגמר ושל ניקוזים בלי להפריד ולסמן אותן לפי סיכון.