PCR מרובה מטרות: זיהוי כמה מיקרואורגניזמים בתגובה אחת

מהו PCR מרובה מטרות?

PCR מסורתי (או ״סימפלקס״) מגביר ומזהה מטרה גנטית אחת בכל תגובה: מבחנה אחת, מיקרואורגניזם אחד. PCR מרובה מטרות משלב כמה סטים של פריימרים וגששים — כל אחד מסומן בפלואורופור אחר — באותה תגובה, ומאפשר לזהות כמה מיקרואורגניזמים או גנים במבחנה אחת ובהרצה אחת.

כיצד הוא מבחין בין המטרות?

כל גשש פולט פלואורסצנציה בערוץ צבע אחר (FAM, HEX, ROX, Cy5 ואחרים), כך שמכשיר ה-PCR יכול לקרוא כמה אותות בו-זמנית והתוכנה משייכת כל אחד למיקרואורגניזם המתאים. המגבלה המעשית אינה מספר המיקרואורגניזמים שמבקשים לחפש, אלא כמה ערוצי פלואורסצנציה שונים המכשיר מסוגל לקרוא וכמה פריימרים יכולים להתקיים באותה תגובה בלי להפריע זה לזה.

יתרונות לעומת הרצת כמה בדיקות PCR נפרדות

פחות זמן ופחות דגימה

במקום לחלק דגימה לכמה מבחנות כדי לחפש סלמונלה, ליסטריה ו-E. coli בנפרד, בדיקה מרובה אחת מספקת את שלוש התוצאות בבת אחת, ומצמצמת את נפח הדגימה, הריאגנטים וזמן הבודק.

פחות שונות בין התוצאות

ניתוח אותן מטרות באותה תגובה ובאותם תנאים מפחית את הסיכון לשונות הקיים בהשוואת תוצאות ממבחנות ומהרצות נפרדות.

מגבלות ושיקולי תכנון

תכנון בדיקה מרובה אמינה מורכב יותר מתכנון בדיקה פשוטה: פריימרים של מטרה אחת עלולים להפריע לאלה של אחרת (דימרים של פריימרים), והוספת יותר מדי מטרות עלולה להפחית את רגישותה של כל אחת בנפרד. לכן תכנון פאנל מרובה מטרות — מה לשלב ובאילו יחסים — הוא עבודת אופטימיזציה מקצועית בפני עצמה, הנתמכת יותר ויותר בכלי תכנון ממוחשבים.

היכן משתמשים בו בתעשיית המזון?

הוא בעל ערך מיוחד בפאנלים משולבים של פתוגנים (למשל סלמונלה + ליסטריה + E. coli O157:H7 + S. aureus בבדיקה אחת) ובפאנלים לקלקול המחפשים בו-זמנית חיידקים חובבי חומציות, שמרים ועובשים במשקאות.