نقل العينات الميكروبيولوجية وحفظها: من نقطة أخذ العينة إلى المختبر

تظل العينة تتغير بعد أخذها

بين لحظة أخذ العينة ولحظة فتحها من قبل المحلِّل قد تمر ساعات أو أيام. وفي هذه الفترة، قد تتكاثر البكتيريا إذا سخنت العينة، أو تموت إذا جُمّد منتج كان ينبغي أن يُنقل مبرَّدًا، أو تظل معرَّضة لمطهِّر لم يُعادَل. والنتيجة النهائية تصف العينة كما وصلت إلى المختبر، وليس بالضرورة كما كانت في المصنع.

ويطرح الدليل البكتريولوجي التحليلي (BAM) الصادر عن FDA الأمر بلا مواربة: فإذا جُمعت العينات بصورة غير ملائمة، أو أُسيئت مناولتها، أو لم تمثّل الدفعة، فإن نتائج المختبر تفقد معناها. وتعرض هذه المقالة ما تقوله المراجع الرئيسية عن كيفية إيصال العينة من نقطة أخذها إلى طاولة المحلِّل.

العبوات والوسم

يوصي BAM بإرسال المنتج، كلما أمكن، في عبوته الأصلية غير المفتوحة. وحين لا يكون ذلك ممكنًا، يجب نقل الأجزاء بصورة معقمة إلى عبوات نظيفة وجافة ومعقمة ومحكمة الإغلاق وواسعة الفم، مع تجنب الزجاج الذي قد ينكسر. وبالنسبة للمنتجات الجافة تصلح أكياس أو علب معقمة؛ أما الأكياس البلاستيكية المعقمة فلا ينبغي استخدامها إلا مع المواد الجافة وغير المجمدة. بعض التوصيات الملموسة:

• الحصول على 100 غ على الأقل لكل وحدة عينة.
• عدم الإفراط في ملء الأكياس وتجنب أن تثقبها أسلاك الإغلاق.
• تعريف كل وحدة بشريط موسوم؛ ويثني BAM عن الكتابة بقلم تحديد على البلاستيك لأن الحبر قد ينفذ عبره.
• إرسال عبوة معقمة فارغة معرَّضة لظروف أخذ العينات نفسها كضابط.
• تسجيل تاريخ ووقت أخذ كل عينة ووصولها إلى المختبر.

درجة الحرارة بحسب نوع المنتج

القاعدة العامة في BAM هي تسليم العينات إلى المختبر في أقرب وقت مع الحفاظ، قدر الإمكان، على ظروف تخزينها الأصلية:

• المنتجات الجافة أو المعلَّبة غير القابلة للتلف: يمكن نقلها بدرجة حرارة الغرفة.
• المنتجات المجمدة: يجب أن تبقى مجمدة تمامًا في جميع الأوقات، في عبوات مبرَّدة مسبقًا وحاويات صلبة معزولة.
• المنتجات المبرَّدة: تُبرَّد بالثلج عند 0-4 °م وتُنقل في صندوق بمادة تبريد قادرة على الحفاظ على تلك الحرارة حتى الوصول. ولا ينبغي تجميدها. وما لم يُشر إلى غير ذلك، لا ينبغي تحليلها بعد مرور أكثر من 36 ساعة على أخذها.
• الرخويات والمحاريات: لها ظروفها الخاصة. ويشير BAM إلى فحصها مثاليًا خلال 6 ساعات وألّا يتجاوز ذلك 24 ساعة بعد أخذها.

وبالنسبة للعينات السائلة، يقترح BAM أخذ وحدة إضافية كضابط لدرجة الحرارة وقياسها عند أخذ العينة وعند استلامها. وهي طريقة بسيطة لتوثيق أن سلسلة التبريد حُفظت.

عينات الأسطح: المعادِل والساعة

في عينات المسحات والإسفنجات ثمة عامل إضافي: بقايا المطهِّرات. فإن لم تُعادَل، قد تواصل تعطيل الكائنات الدقيقة أثناء النقل وتعطي سلبيًا كاذبًا. وقد أشار إصدار 2004 من ISO 18593 بالفعل إلى أنه لا يوجد معادِل شامل، وذكر بعض الخيارات المعتادة: الليسيثين ومونوأوليات السوربيتان لمركبات الأمونيوم الرباعي، وثيوكبريتات الصوديوم للمنتجات القائمة على الهالوجينات، والكاتالاز أو البيروكسيداز للمطهِّرات القائمة على البيروكسيدات. ويُستحسن اختيار المعادِل بحسب المعقِّم الذي يستخدمه المصنع، كما يُعلَّق في الدليل الخاص بـ التحقق من الأسطح بعد التعقيم.

أما الإصدار الساري، ISO 18593:2018، فهو المرجع الذي تحدده اللائحة (EC) 2073/2005 لأخذ عينات من مناطق ومعدات العملية. ويشير إلى نقل العينات مبرَّدة بين 1 °م و8 °م وفحصها يُفضَّل خلال 24 ساعة من أخذها. وبالنسبة لذبائح الحيوانات، تحيل اللائحة نفسها إلى ISO 17604، الذي يصف طرق أخذ العينات وقواعد التخزين والنقل.

عينات المياه: الكلور المتبقي

يطرح الماء المكلور المشكلة نفسها كالأسطح المعقَّمة: فالكلور يواصل عمله داخل القارورة. ويشير ISO 19458:2006، معيار أخذ عينات المياه للتحليل الميكروبيولوجي، إلى إضافة ثيوكبريتات الصوديوم إلى القوارير قبل أخذ العينة. ووفقًا للمعيار، يلزم 7.1 ملغ من ثيوكبريتات الصوديوم خماسية الماء لتعطيل 1 ملغ من الكلور، والجرعة المعتادة 0.1 مل من محلول 18 ملغ/مل لكل 100 مل من سعة القارورة. ومع تراكيز كلور أعلى يلزم جرعة أكبر. ويوضح المعيار أن الثيوكبريتات لا تؤثر في العينة ويمكن استخدامها أيضًا في المياه غير المكلورة. ويُشرح تفسير مؤشرات المياه في مقالة القولونيات وE. coli والمكورات المعوية في الماء.

تخطيط الشحن قبل أخذ العينات

يمكن تجنب جانب كبير من مشكلات النقل قبل أخذ العينة الأولى. فيوصي BAM بإخطار المختبر مسبقًا عند إرسال عينات قابلة للتلف، وهذا التنسيق يتيح التأكد من ثلاثة أمور: أن المختبر سيتمكن من استلام العينات ومعالجتها خلال المدة القصوى، وما الحجم أو الوزن الذي يحتاجه لكل تحليل، وأي معايير قبول سيطبّقها عند الاستلام. كما يُستحسن تحديد من المسؤول عن الصندوق أثناء الرحلة، وأين تُسجَّل درجة الحرارة، وكيف تُفصل العينات ذات المخاطر المختلفة، مثل المنتج النهائي وعينات المصارف، لتجنب التلوث المتصالب بينها.

الاستلام في المختبر

لا تنتهي المراقبة عند باب المختبر. ويصف BAM استلامًا بخطوات واضحة:

• فحص حالة العبوة: الكسور أو الثقوب أو الأغطية المرتخية أو الأكياس المثقوبة تُبطل العينة لخطر التلوث المتصالب.
• التحقق من الوسم والسجلات: يجب أن تصل كل وحدة معرَّفة، بوثائقها، وفي العينات الرسمية مختومة.
• التحقق من خطة أخذ العينات: أن يكون عدد الوحدات المأخوذة هو المطابق للتحليل المطلوب.
• التخزين إذا لم يُحلَّل فورًا: المجمدة عند −20 °م، والقابلة للتلف مبرَّدة عند 0-4 °م لمدة لا تزيد على 36 ساعة، والمنتجات غير القابلة للتلف أو منخفضة الرطوبة بدرجة حرارة الغرفة.
• إخطار من أخذ العينة حين لا تستوفي الشروط، للحصول على عينة صالحة ولتجنب تكرار المشكلة.

إذابة التجميد دون تغيير العينة

يفضّل BAM عدم الإذابة قبل التحليل. وإذا لزم، يوصي بإجرائها في العبوة الأصلية عند 2-5 °م، وهو ما يستغرق عادةً حتى 18 ساعة؛ وللإذابة السريعة، دون 45 °م لمدة لا تزيد على 15 دقيقة، مع رج متواصل في حمام مضبوط الحرارة.

ويدرج ISO/IEC 17025 مناولة أصناف الفحص ضمن متطلبات عملياته: فيجب على المختبر تسجيل أي انحراف عن الظروف المحددة عند استلام العينة، وإذا أصرّ العميل مع ذلك على تحليلها، بيان في التقرير أي النتائج قد تتأثر. ومعايير الاستلام أحد الأسئلة التي ينبغي طرحها على أي مختبر، كما يُقترح في مقالة اعتماد ISO/IEC 17025.

أخطاء شائعة

• تجميد منتجات مبرَّدة «لحفظها بصورة أفضل»، ما يتلف الخلايا وقد يقلل نتائج العدّ.
• إرسال عينات بعد ظهر يوم الجمعة إلى مختبر لا يستقبل في عطلات نهاية الأسبوع.
• استخدام مسحات أو إسفنجات دون معادِل مناسب للمعقِّم المستخدم في المصنع.
• أخذ ماء مكلور في قوارير دون ثيوكبريتات.
• عدم تسجيل وقت أخذ العينة، ما يحول دون إثبات احترام المدة القصوى حتى التحليل.
• وضع عينات المنتج النهائي وعينات المصارف في الصندوق نفسه دون فصلها أو وسمها بحسب الخطر.